Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология

На правах рукописи


Троценко Иван Дмитриевич


АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ПРИ ПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ


14.01.12-онкология


Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата мед наук


www.rncrr.ru


Москва-2012

Работа выполнена в ФГБОУ Русский институт дружбы народов (ректор –академик Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология РАО, доктор В.М. Филиппов) и ФГБУ Русский научный центр рентгенорадиологии Министерства здравоохранения и общественного развития Русской Федерации (директор – член–корреспондент РАМН, доктор В.А.Солодкий).


^ Научный управляющий

Доктор мед наук, доктор Н Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология.В. Харченко


Научный консультант

Доктор мед наук, доктор В.К. Боженко



^ Официальные оппоненты:

Ашрафян Лев Андреевич,

член-корр. РАМН, доктор,

ФГБУ «РНЦРР» Минздравсоцразвития Рф,

управляющий лаборатории комбинированных способов исцеления гинекологических болезней





^ Бабкина Ира Валентиновна,

доктор мед наук Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология,

ФГБУ «РОНЦ им.Н.Н.Блохина» РАМН,

ведущий научный сотрудник лаборатории медицинской биохимии




Ведущая организация: ФГБУ «Московский научно-исследовательский онкологический институт имени П.А. Герцена» Министерства здравоохранения и общественного Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология развития Русской Федерации

Защита состоится « 22 » октября 2012 г. в 16 час. на заседании диссертационного совета Д 208.081.01 при ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Министерства здравоохранения и общественного развития Русской Федерации (117997, г. Москва, ул. Профсоюзная, д. 86)


С диссертацией Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ Русского института дружбы народов и ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздравсоцразвития Рф.


Автореферат разослан « 20 » сентября 2012 года.


Ученый секретарь диссертационного совета
^ Доктор мед наук, доктор З.С. Цаллагова
ОБЩАЯ Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология Черта РАБОТЫ

Актуальность темы


Рак молочной железы (РМЖ) в текущее время является более всераспространенным онкологическим болезнью в женской популяции, составляя 20,5% от всех онкологических болезней (Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2011). Сразу довольно высочайшими Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология, до 70%, являются характеристики выявляемости заболевания на ранешних (I-II) стадиях, что позволяет использовать наименее ядовитые программки исцеления (Харченко В.П., Рожкова Н.И., 2010). С другой стороны, лишне щадящая стратегия в отношении Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология онкологических нездоровых связана с риском рецидивирования заболевания.

Выбор стратегии исцеления при раке молочной железы определяется сочетанием причин, описывающих такие особенности опухоли как размер образования, наличие метастазов в регионарные лифоузлы, степень злокачественности, пролиферативная активность, оцениваемая Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология по уровню экспрессии белка Ki67 (Jalava P., et al., 2006) и т.д (A. Goldhirsch, W. C. Wood, 2009). При всем этом, конкретными показаниями для адьювантной химиотерапии принято считать большой размер опухоли Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология (Т>5 см), более 4 метастазов в регионарные лимфоузлы (N2-N3), высочайшая степень злокачественности (G3) и высочайшая пролиферативная активность (экспрессия Ki67 более 30%), малые значения по данным аспектам (Т<2 см, N0, G1, Ki67≤15%) представляют собой Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология относительные показания для адьювантной гормонотерапии. Но при размере опухоли от 2.1 до 5 см, наличии метастазов в 1-3 регионарных лимфоузлах (N1), 2 степени злокачественности (G2), экспрессии Ki67 16-30%енобходимость предназначения адьювантной химиотерапии является недоказанной. Таким макаром, внедрение Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология «классических» причин прогноза не всегда позволяет правильно выделить группу высочайшего риска рецидивирования.

В бессчетных исследовательских работах сказано, что исследование экспрессии 1-го либо комплекса генов в ткани опухоли имеет независящее прогностическое значение (Chang, 2007, Cobliegh, 2005, Esteva, 2005, Gianni Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология, 2005, Habel, 2006, Mina, 2006, Paik, 2004, и Paik, 2006). А именно, специалисты конференции StGallen 2011 признают, что внедрение профиля экспрессии генов OncotypeDXTM, в базе которого лежит оценка экспрессии мРНК 16 генов, участвующих в процессах пролиферации Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология, апоптоза и клеточной дифференцировки, правильно отражает биологическую гетерогенность рака молочной железы и может применяться для определения прогноза заболевания и советы предназначения химиотерапии (Gnant М., 2011). Таким макаром, выявление закономерностей экспрессии генов, участвующих в процессах пролиферации, апоптоза Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология, клеточной дифференцировки и межклеточных взаимодействий в ткани доброкачественных и злокачественных образований может дать новые, более достоверные причины прогноза и повысить эффективность дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных образований молочной железы Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология.


^ Цель работы

Изучить экспрессию комплекса генов, участвующих в процессах пролиферации, апоптоза, клеточной дифференцировки и межклеточных взаимодействий в морфологически неизмененной ткани молочной железы при фиброаденоме и инвазивном раке молочной железы, и найти связь их экспрессии с Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология клинико-морфологическими чертами доброкачественных и злокачественных опухолей.

^ Задачки исследования



^ Научная новизна

Количественно определена экспрессия мРНК 17 генов маркеров пролиферации, апоптоза, клеточной дифференцировки и межклеточных взаимодействий в неизмененной Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология ткани молочной железы, в ткани фиброаденомы и рака молочной железы на разных стадиях заболевания. Исследована связь относительного содержания мРНК исследуемых генов в ткани опухоли молочной железы с основными клинико-морфологическими особенностями опухоли Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология. В первый раз оценена связь уровня экспрессии генов в морфологически неизмененной ткани с морфологическими особенностями рака молочных желез. Получены статистически важные отличия экспрессии исследуемых генов зависимо от типа опухоли, также зависимо Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология от клинико-морфологических черт рака молочной железы. На основании определения и сопоставления уровня экспрессии мРНК сенсора прогестерона PGR в ткани рака молочной железы разработан метод, позволяющий выявлять опухоли, имеющие неблагоприятные молекулярно-биологические свойства Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология.


^ Научно-практическая значимость

В итоге проведенного исследования оценена клиническая значимость и информативность определения уровня экспрессии мРНК комплекса генов в ткани фиброаденомы молочной железы и ткани рака молочной железы. Разработан метод определения конфигурации Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология направления экспрессии мРНК сенсора прогестерона PGR при раке молочной железы как дополнительный диагностический аспект в всеохватывающей диагностики потенциально более злокачественных опухолей.


^ Положения, выносимые на защиту

  1. Экспрессия активаторов пролиферации, ингибиторов апоптоза, клеточных рецепторов и генов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология межклеточных взаимодействий в образчиках инвазивного рака молочной железы существенно повышена по сопоставлению с морфологически неизмененной тканью и фиброаденомой.

  2. В образчиках инвазивного РМЖ при большенном размере опухоли, наличии регионарных и отдаленных Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология метастазов повышена экспрессия активаторов пролиферации, ингибиторов апоптоза и генов межклеточных взаимодействий.

  3. Активность процессов пролиферации и апоптоза в морфологически неизмененной ткани связана с уровнем экспрессии рецепторов стероидных гормонов и HER2/neu опухоли при раке молочной Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология железы.

  4. Сравнительная персональная оценка экспрессии генов в образчиках опухоли и морфологически неизмененной ткани дает дополнительную информацию для выявления потенциально более злокачественных опухолей.



^ Апробация материалов диссертации.

Материалы диссертации были доложены: на II Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология Междисциплинарном форуме «Медицина молочной железы: на стыке специальностей», Москва в 2012 году; Worldwide Innovative Networking in personalized cancer medicine (WIN) 2012, Париж. Апробация работы прошла в ФГУ Русском научном центре рентгенорадиологии Росмедтехнологий 09 апреля 2012 года.


Публикации

По Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология теме диссертации размещено 6 работ, из их 4 в журнальчиках, рецензируемых ВАК.


^ Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 105 страничках и состоит из введения, 3-х глав, также выводов и перечня литературы. Указатель литературы Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология содержит ссылки на 12 российских и 220 забугорных создателей. Диссертация иллюстрирована 23 таблицами и 14 рисунками.


^ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И Способы ИССЛЕДОВАНИЯ


Черта обследованных пациентов.

Изучен уровень экспрессии 21 гена в 190 образчиках ткани молочной железы, из их 57 образцов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология рака молочной железы (РМЖ), 38 образцов фиброаденомы (ФА) молочной железы и 95 образцов морфологически неизмененной ткани. Средний возраст нездоровых ФА составил 33,1±10,6 лет, средний размер опухоли 3,2±2,9 см3. В 65% опухоль локализовалась в верхне-наружном квадранте молочной железы Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология.

Средний возраст нездоровых РМЖ составил 57,1±11 лет. В 63,1% (36 из 57 случаев) гистологически опухоль была представлена инфильтративным протоковым раком, в 19,2% (11 из 57) – инфильтративным дольковым, в 8,7% (10 из 57) наблюдались остальные формы (муцинозный рак и др.). В 75,3% (43 из 57 случаев) размер Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология опухоли не превосходил 5 см, в 10,5% (11 из 57) наблюдалось распространение опухоли на кожу молочной железы, грудную стену, инфильтративные отечные формы (Т4). Регионарные метастазы (N1 – N3) наблюдались в 46,6% (26 из 57 случаев), отдаленные (на момент операции Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология) в 7,1% (4 из 57). Опухоли I, II и III степени злокачественности встречались в 14% (8 из 57), 56,1% (32 из 57) и 29,9% (17 из 57), соответственно. Экспрессия рецепторов эстрогена наблюдалась в 66,7% (38 из 57), прогестерона в 63,2% (36 из 57), гиперэкспрессия HER2/neu (3+) в 14% (8 из 57), амплификация c Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология-erbB2 в 29,2% (9 из 32 случаев).

Все пациентки проходили обследование и получали исцеление в хирургических отделениях ФГБУ «РНЦРР» Минздравсоцразвития в период с ноября 2009 по июль 2011 года. Гистологические заключения давались в согласовании с гистологической систематизацией опухолей молочной Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология железы (ВОЗ, 2003г.) (F.A. Tavassoli, P. Devilee ”Pathology and Genetics of Tumours of the Breast and Female Genital Organs”. - IARC, Lyon.- 2003: 432). Оценка степени злокачественности рака молочной железы давалась в соответствие Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология с аспектами Elston-Ellis (Elston C.W., Ellis I.O. “Pathological prognostic factors in breast cancer. I. The value of histological grade in breast cancer: experience from a large study with Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология long-term follow-up.”- Histopathology.- 1991. - v.19.- №5.- р.403–410.).

Для иммуногистохимического (ИГХ) определения экспрессии рецепторов эстрогена и прогестерона использовались антитела (NCL-L-ER-6F11, NCL-L-PGR-312, Leica, Англия). Для ИГХ определения экспрессии онкобелка C-erbB Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология2 применены моноклональные мышиные антитела NCL-L-CB11 производства конторы Leica, Англия. Результаты иммуногистохимических реакций экспрессии рецепторов эстрогена и прогестерона оценивались полуколичественным методом (Allred D.C., et al., 1998). Оценка экспрессии онкобелка Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология C-erbB2 производилась согласно советам A. C. Wolff и соавт. 2007.

Анализ уровня экспрессии генов проводился на основании количественного измерения мРНК способом ПЦР с оборотной транскрипцией. Для каждого эталона анализировалась экспрессия 21 гена (17 многофункциональных генов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология и 5 референсных). Для удобства интерпретации результатов многофункциональные гены были объединены в 5 групп: гены -маркеры пролиферации (KI67, STK15, CCNB1) и ингибитор пролиферации PTEN, гены ингибиторы апоптоза (BIRC5, BCL2, BAG1, TERT) и активаторы апоптоза Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология(BAX, NDRG1), гены клеточной дифференцировки: сенсор эстрогена ESR, сенсор прогестерона PGR, сенсор эпидермального фактора роста C-erbB2 и его гомолог GRB7, также маммаглобин MGB1, и гены межклеточных взаимодействий (MMP11, CTSL2). В качестве референсных Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология использовали гены GUSB, B2M, ABL, HPRT и TBP.

Забор исследуемого материала для молекулярно-генетического анализа проводился сходу после операции по поводу рака молочной железы либо фиброаденомы. После получения ткани она немедля Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология помещалась в стабилизирующий раствор (EverFresh RNA, «Клоноген», Наша родина) и хранилась при -70оС. В каждом случае сразу выполнялся забор морфологически неизмененной ткани молочной железы. Выделение РНК проводили согласно аннотации при помощи наборов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология реагентов для выделения РНК RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, USA). Реакции оборотной транскрипции и ПЦР ставили, используя наборы и оборудование НПО «ДНК Технология» согласно протоколу производителя. Уровень экспрессии мРНК определяли в Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология относительных единицах, определяемых способом сопоставления индикаторных циклов (Cp).

Статистическую обработку результатов исследования проводили с внедрением способов непараметрического и параметрического анализа. Различие групп считали статистически весомым при Р<0,05. Обработку приобретенных результатов проводили в программном пакете Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология Statistica 6.0 (StatSoft, USA).


^ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ


Сравнительная оценка экспрессии генов в образчиках морфологически неизмененной ткани, фиброаденомы и рака молочной железы.


^ I. Анализ конфигурации экспрессии генов зависимо от типа ткани.

    1. Сопоставление морфологически неизмененной Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология ткани (МНТ) и ткани рака молочной железы (РМЖ)

При сравнительном анализе экспрессии 17 генов в морфологически неизмененной ткани и образчиках инвазивного РМЖ был выявлен ряд достоверных различий. В таблице 1 представлены значения экспрессии генов, для Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология которых отличия статистически значимы.


Таблица 1. Уровни экспрессии генов в образчиках морфологически неизмененной ткани (МНТ) и при раке молочной железы (РМЖ). Статистически важные отличия отмечены *.

Ген

n - МНТ

n - РМЖ

Среднее - МНТ

Среднее - РМЖ

p

KI 67

57

57

16,24

115,34

0,000001*

STK15

57

57

52,29

230,16

0,000011*

CCNB Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология1

57

57

11,03

54,45

0,000004*

PTEN

57

57

10,95

7,31

0,000314*

BCL2

57

57

65,00

38,99

0,008238*

NDRG1

57

57

490,11

175,43

0,000012*

BIRC5

57

57

24,29

113,66

0,000086*

ESR

57

57

170,86

375,36

0,002346*

PRG

57

57

1953,76

4241,21

0,013229*

GRB7

57

57

394,06

1991,66

0,027666*

MGB1

57

57

23351,24

91731,80

0,012923*

MMP11

57

57

25,94

237,78

0,000062*

р*- отличия меньше 0,05


Для генов-маркеров пролиферации (KI67, CCNB1, STK15) отмечено существенное увеличение уровня экспрессии в образчиках РМЖ по сопоставлению с неизмененной тканью. Для опухолевого супрессора PTEN получены Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология достоверно более высочайший уровень экспрессии в МНТ по сопоставлению с РМЖ. Таким макаром, для ткани РМЖ типично существенное увеличение пролиферативной активности по сопоставлению с МНТ.

При определении экспрессии генов контроля Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология апоптоза для ингибитора апоптоза BCL2 отмечено понижение экспрессии в образчиках РМЖ по сопоставлению с МНТ. Для генов, участвующих в регуляции наружного пути апоптоза (BIRC5 и NDRG1), наблюдается увеличение экспрессии ингибитора апоптоза BIRC5 и понижение Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология уровня экспрессии активатора каспаз NDRG1 при РМЖ по сопоставлению с МНТ. Разнонаправленность конфигурации экспрессии генов контролирующих апоптоз может свидетельствовать о дискоординации процессов апоптоза при РМЖ.

При анализе экспрессии генов клеточной дифференцировки отмечено Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология статистически важное увеличение экспрессии мРНК ESR, PGR, GRB7 и MGB1 при РМЖ.

При анализе генов, включенных в кластер межклеточных взаимодействий, достоверные отличия получены для MMP11, матриксной металлопротеиназы, разрушающей межклеточный Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология матрикс. Ее экспрессия значительно повышена при инвазивном РМЖ, что может быть связано с завышенной протеолитической активностью клеток опухоли.

Таким макаром, клеточки рака молочной железы отличаются завышенной пролиферативной и протеолитической активностью по сопоставлению Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология с морфологически неизмененной тканью молочной железы. Не считая того, в целом в образчиках РМЖ снижена экспрессия активаторов апоптоза и повышен уровень экспрессии рецепторов стероидных гормонов.


^ 1.2 Анализ конфигурации экспрессии генов в ткани фиброаденомы молочной железы.

При Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология сравнительном анализе экспрессии генов в образчиках морфологически неизмененной ткани и фиброаденомы статистически важных различий экспрессии для генов-маркеров пролиферации и апоптоза получено не было, кроме активатора апоптоза BAX, экспрессия Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология которого была снижена в образчиках ФА (Таблица 2). В группе генов клеточной дифференцировки в образчиках ФА по сопоставлению с МНТ была повышена экспрессия ESR, C-erbB2 и MGB1, также матриксной металлопротеиназа ММР11.


Таблица Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология 2. Уровни экспрессии генов в образчиках неизмененной ткани и при фиброаденоме ФА

Ген

n - МНТ

n - ФА

Среднее МНТ

Среднее ФА

p

BAX

38

38

21,63

11,52

0,031106*

ESR

38

38

58,41

592,22

0,001124*

C-erbB2

38

38

23,38

63,70

0,108310

MGB1

38

38

5695,54

24790,50

0,092220

MMP11

38

38

3,36

13,74

0,092982


Отсутствие статистически важных различий экспрессии генов-маркеров пролиферации и апоптоза в образчиках МНТ и ФА может Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология свидетельствовать о сохранении баланса этих процессов в ткани фиброаденомы, а одновременное увеличение экспрессии мРНК рецепторов эстрогена, C-erbB2 и MMP11 отличает ФА от морфологически неизмененной ткани.


^ 1.3 Сопоставление экспрессии генов в ткани фиброаденомы Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология и рака молочной железы.

Поиск молекулярных различий доброкачественных и злокачественных новообразований представляет клинический энтузиазм, т.к. морфологическая картина не всегда дает исчерпающую информацию.

В образчиках РМЖ по сопоставлению с ФА был отмечен Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология существенно более высочайший уровень экспрессии маркеров пролиферации (KI67, STK15 и CCNB1) и ингибитора апоптоза BIRC5. Сразу в образчиках ФА экспрессия ингибитора пролиферации PTEN и активатора апоптоза NDRG1 была выше, а Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология экспрессия матриксной металлопротеиназы MMP11, напротив, ниже по сопоставлению с эталонами РМЖ. В таблице 3 приведены данные только для генов, экспрессия которых в образчиках отличается статистически значимо либо имеет выраженную тенденцию.


Таблица 3. Сопоставление уровня экспрессии генов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология в образчиках ткани фиброаденомы и рака молочной железы.

Ген

n ФА

n РМЖ

Среднее ФА

Среднее РМЖ

p

KI 67

38

57

22,45

115,34

0,006858*

STK15

38

57

52,70

230,16

0,050340

CCNB1

38

57

14,08

54,45

0,060180

PTEN

38

57

11,70

7,31

0,003554*

NDRG1

38

57

342,06

175,43

0,037029*

BIRC5

38

56

16,79

113,66

0,052468

MMP11

38

57

16,83

237,78

0,051963


Таким макаром, в образчиках РМЖ наблюдается существенно более высочайший уровень пролиферативной Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология, антиапоптотической и протеолитической активности по сопоставлению с ФА при отсутствии статистически важных различий экспрессии рецепторов стероидных гормонов и эпидермального фактора роста (C-erbB2).

Как уже ранее отмечалось, активность процессов пролиферации и Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология апоптоза в клеточках ФА сравнима с морфологически неизмененной тканью. При всем этом завышенная активность экспрессии рецепторов экстрогена и C-erbB2 отличает ФА от неизмененной ткани. При сопоставлении ФА и РМЖ наблюдаются значимые отличия Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология экспрессии маркеров пролиферации и апоптоза. Данные результаты могут свидетельствовать о различной природе устройств контроля пролиферации и апоптоза в клеточках фиброаденомы и рака молочной железы, чем, возможно, и объясняются различия в морфологических Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология проявлениях ФА и РМЖ. Отсутствие статистически важных различий экспрессии рецепторов стероидных гормонов и эпидермального фактора роста в образчиках ФА и РМЖ на фоне значимого увеличения пролиферативной активности в клеточках злокачественной опухоли косвенно может указывать на Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология базовое свойство автономности опухолевого роста – отсутствие необходимости во наружных стимулах для поддержания высочайшего уровня пролиферации.

На рисунках 1 и 2 представлены сравнительные уровни экспрессии маркеров пролиферации (KI67, STK15 и CCNB1) и Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология апоптоза (ингибитора апоптоза BIRC5 и проапоптотического NDRG1) в разных типах исследованной ткани (морфологически неизмененная ткань, фиброаденома, инвазивный рак молочной железы).



Набросок 1. Сопоставление уровня экспрессии генов пролиферации (KI67, AURKA, CCNB1) зависимо от типа ткани




Набросок 2. Сопоставление Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология уровня экспрессии генов контроля апоптоза (NDRG1 и BIRC5) зависимо от типа ткани


^ 3. Анализ экспрессии генов зависимо от морфологических черт ткани в образчиках рака молочной железы.

Повышение размеров опухоли, возникновение либо повышение Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология количества лимфогенных либо возникновение гематогенных метастазов также может характеризоваться разными закономерностями экспрессии генов, описание которых может стать дополнительным диагностическим инвентарем и позволит проводить более прецизионную оценку био параметров ткани опухоли.


^ 3.1 Анализ экспрессии Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология генов зависимо от размеров опухоли

При сопоставлении уровня экспрессии исследуемых генов в образчиках тканей РМЖ относительно размеров опухолевого узла по данным морфологического исследования наибольшее количество статистически важных различий экспрессии наблюдается при сопоставлении групп Т1 - Т2 (таблица Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология 4).


Таблица 4. Отличия уровня экспрессии генов зависимо от размеров опухоли в образчиках РМЖ.

Ген

n – Т1

n – Т2

Среднее Т1

Среднее Т2

p

STK15

17

18

115,2

382,87

0,007009*

CCNB1

17

18

29,2

82,46

0,016579*

PTEN

17

18

7,8

5,51

0,014793*

BCL2

17

18

45,6

27,16

0,060804

BIRC5

17

18

56,1

151,79

0,003388*

MGB1

17

18

184654,0

51119,70

0,102752


При увеличении размеров Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология опухоли отмечается статистически важное увеличение экспрессии генов маркеров пролиферации STK15 и CCNB1, понижение экспрессии опухолевого супрессора PTEN. Для генов кластера апоптоза типично увеличение экспрессии BIRC5 и понижение экспрессии BCL2. Экспрессия маммаглобина MGB Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология1 была снижена в опухолях Т2. Таким макаром, повышение размеров опухоли сопровождается увеличением пролиферативной и антиапоптотической активности. На рисунке 3 представлен график, отражающий динамику конфигурации экспрессии маммглобина зависимо от размера опухоли.



Набросок 3. Изменение экспрессии маммаглобина (MGB Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология) зависимо от размера опухоли.


На графике видно, что изменение экспрессии маммаглобина назад пропорционально повышению размеров опухоли. Любопытно, что закономерность нарушается для образцов Т4, экспрессия MGB в каких сравнима с эталонами Т2; возможным разъяснением Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология являются разные аспекты систематизации, используемые для стадирования образцов Т1 – Т3 и образцов Т4.


^ 3.2 Анализ экспрессии генов зависимо от наличия метастатических лимфоузлов и отдаленных метастазов (N и М по систематизации TNM)

Был проведен Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология анализ экспрессии генов в образчиках РМЖ зависимо от наличия метастазов в регионарные лимфоузлы (N) и отдаленных метастазов (М). Получены достоверные отличия экспрессии CCNB1, BAX, BIRC5, CTSL2, MMP11, C-erbB2 при сопоставлении Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология уровня экспрессии генов меж эталонами N0 (отсутствуют метастазы в регионарных лимфоузлах) и эталонами N2 (метастазы в 4-9 регионарных лимфоузлов) (таблица 5). Аналогично получены отличия уровня экспрессии KI 67, CTSL2, BIRC5 при сопоставлении образцов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология М0 и М1 (таблица 6).

В образчиках N2 повышена экспрессия маркера пролиферации CCNB1 по сопоставлению с N0, ингибитора каспаз BIRC5, проапоптотического гена BAX, сенсора эридермального фактора роста C-erbB2, также протеолитических ферментов MMP11 и CTSL2.

Таблица Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология 5. Отличия экспрессии генов в образчиках РМЖ зависимости от наличия/отсутствия лимфогенных метастазов

Ген

n – N0

n – N2

Среднее N0

Среднее N2

p

CCNB1

31

8

43,4

96,01

0,050648

BAX

31

8

21,1

31,99

0,043132*

BIRC5

31

8

85,1

246,41

0,020292*

C-erbB2

31

8

37,7

109,09

0,079520

MMP11

31

8

169,9

440,78

0,088813

CTSL2

31

8

23,9

137,06

0,041970*


В образчиках М1 по сопоставлению Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология с М0 была повышена экспрессия маркера клеточной пролиферации KI67 и ингибитора апоптоза BIRC5, также протеиназы катепсина CTSL2. Таким макаром, опухоли при наличии лимфогенных либо гематогенных метастазов отличаются завышенной экспрессией маркеров пролиферации Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология и ингибиторов апоптоза, также увеличением активности генов (MMP11 и CTSL2), участвующих в процессах ремоделирования матрикса (таблица 6).

Таблица 6. Отличия экспрессии генов в образчиках РМЖ зависимости от наличия/отсутствия гематогенных метастазов

Ген

n – М0

n – М Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология1

Среднее М0

Среднее М1

p

KI 67

53

4

104,87

254,07

0,004816*

BIRC5

52

4

96,07

342,33

0,001441*

CTSL2

53

4

23,38

232,86

0,000328*

Согласно результатам ранее проведенного анализа пролиферативная и протеолитическая активность в злокачественной опухоли в целом выше по сопоставлению с морфологически неизмененной тканью. Прогрессирование заболевания (увеличении размеров опухоли Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология, наличии лимфогенных и гематогенных метастазов) сопровождается предстоящим увеличением пролиферативной и протеолитической активности клеток на фоне понижения апоптоза.


^ 3.3 Анализ экспрессии генов в ткани РМЖ зависимо от степени злокачественности, статуса рецепторов стероидных гормонов и Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология эпидермального фактора роста HER2/neu.

Степень злокачественности, экспрессия рецепторов стероидных гормонов и эпидермального фактора роста HER2/neu в текущее время являются аспектами для молекулярного фенотипирования рака молочной железы, потому определение Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология закономерностей экспрессии генов, участвующих в процессах пролиферации, апоптоза и т.д. является увлекательным.


^ 3.3.1 Анализ экспрессии генов в ткани РМЖ зависимо от степени злокачественности

Самые большие отличия были получены при сопоставлении экспрессии генов в Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология образчиках первой (G1) и третьей (G3) степени злокачественности. В образчиках G3 была повышена экспрессия генов маркеров пролиферации STK15 и CCNB1, также экспрессия катепсина CTSL2. Экспрессия C-erbB2 и его гомолога GRB7 также была Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология повышена в этой группе, а экспрессия ESR, PGR и MGB1 напротив, снижена (Таблица 7).

Таблица 7. Экспрессия генов в образчиках РМЖ зависимости от степени злокачественности опухоли

Ген

n G1

n G3

Среднее G1

Среднее G3

p

STK Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология15

23

9

150,9

371,50

0,056505

CCNB1

23

9

34,6

55,51

0,062933

PRG

23

9

4347,9

951,11

0,068085

C-erbB2

23

9

17,7

84,25

0,004652*

GRB7

23

9

577,8

4837,16

0,041629*

MGB1

23

9

187572,2

17533,47

0,013123*

CTSL2

23

9

16,0

37,13

0,020145*


Увеличение степени злокачественности на молекулярном уровне сопровождается увеличением пролиферативной и протеолитической активности на фоне завышенной экспрессии мРНК рецепторов эпидермального фактора роста C-erbB2 и его гомолога GRB Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология7, опосредующих пролиферативные сигналы. При всем этом экспрессия маркеров дифференцировки (PGR и MGB) снижена в образчиках G3. Для циклина В (CCNB1) и маммаглобина (MGB) типично антибатное изменение экспрессии с ростом степени злокпчественности, что проиллюстрировано Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология на рисунках 4 и 5, соответственно.




Набросок 4. Изменение экспрессии мРНК циклина В (ССNB1) в опухолях различной степени злокачественности (G1-G3).




Набросок 5. Изменение экспрессии мРНК маммаглобина (MGB1) в опухолях различной степени злокачественности Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология (G1-G3).


^ 3.3.2 Анализ экспрессии генов в ткани РМЖ зависимо от статуса рецепторов стероидных гормонов и HER2/neu по данным ИГХ исследования

При сравнительном анализе экспрессии зависимо от статуса рецепторов стероидных гормонов по данным ИГХ в эстроген Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология-позитивных опухолях повышена экспрессия ингибиторов апоптоза BCL2 и BAG, не считая того, в РЭ+ опухолях снижена экспрессия мРНК эпидермального фактора роста и его гомолога GRB7, также катепсина CTSL2 (Таблица 8). Понижение Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология экспрессии мРНК С-erbB2 и GRB7 в этой группе может указывать на антагонизм экспрессии рецепторов эстрогена и эпидермального фактора роста.


Таблица 8. Уровни экспрессии генов в образчиках РМЖ зависимо от статуса рецепторов эстрогена Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология по данным ИГХ

Ген

n РЭ-

n РЭ+

Среднее РЭ-

Среднее РЭ+

p

BCL2

11

26

20,9

47,8

0,014204*

BAG

11

26

2,9

6,5

0,055183

ESR

11

26

44,1

475,7

0,003644*

PRG

11

26

1372,2

4857,9

0,058054

C-erbB2

11

26

67,3

19,0

0,019363*

GRB7

11

26

3945,0

598,8

0,062202

CTSL2

11

26

36,0

17,2

0,026759*


Сравнительный анализ экспрессии генов в прогестерон-позитивных и прогестерон-негативных опухолях показал, что в ПР Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология+ опухолях снижена экспрессия ингибитора апоптоза TERT (12,6 относительных единиц в ПР+ по сопоставлению с 73,0 о.е. в ПР-; Р=0,0279) и матриксной металлопротеиназы MMP11 (136,5 о.е. по сопоставлению с 277,5 о.е.; Р=0,0896). Также в опухолях Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология с положительным статусом рецепторов стероидных гормонов (РЭ+/РП+) статистически значимо повышена экспрессия мРНК ESR и PGR (Р<0,05).

В целом, при сравнительной оценке экспрессии генов в группах сенсор положительных и негативных опухолей статистически Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология важных различий экспрессии генов-маркеров пролиферации и апоптоза не получено, но активность генов межклеточных взаимодействий (MMP11 и CTSL2) была выше в рецептор-негативных опухолях. При сравнительном анализе экспрессии генов в образчиках с Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология наименьшим (1+) и наибольшим (3+) по данным ИГХ уровнем экспрессии HER2/neu в образчиках 3+ статистически важные отличия получены только для мРНК C-erbB2 (93,3 о.е. при HER2/neu 3+ по сопоставлению с 12,2 о.е при Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология HER2/neu 1+; Р=0,00008) и его гомолога GRB7 (1872,1 о.е. при HER2/neu 3+ по сопоставлению с 370,3 о.е при HER2/neu 1+; Р=0,000002), экспрессия которых выше в образчиках 3+.

Таким макаром, в отличие от таких причин Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология прогноза как размер опухоли, наличие лимфогенных/гематогенных метастазов и степень злокачественности, где изменение пролиферативной и апоптотической активности опухоли было полностью объяснимым, при сравнительном анализе экспрессии генов зависимо от статуса рецепторов стероидных гормонов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология и HER2/neu не получено статистически важных различий по уровню экспрессии генов-маркеров пролиферации и апоптоза. Эти результаты могут косвенно быть следствием парадокса пролиферативнойт автономности опухоли. В тоже время, с учетом роли рецепторов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология стероидных гормонов и HER2/neu в процессах пролиферации и апоптоза в обычной ткани молочной железы, мы провели сравнительную оценку экспрессии генов в МНТ зависимо от ИГХ статуса рецепторов стероидных гормонов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология и HER2/neu в опухоли.


^ 4. Анализ экспрессии генов в морфологически неизмененной ткани зависимо от статуса стероидных гормонов и HER2/neu в образчиках РМЖ по данным ИГХ

Мы провели анализ уровня экспрессии генов в морфологически Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология неизмененной ткани молочной железы зависимо от уровня экспрессии рецепторов в ткани опухоли. Были обнаружены достоверные отличия экспрессии генов в неизмененной ткани при сопоставлении таких фенотипических черт опухоли как статус рецепторов стероидных Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология гормонов и HER2/neu. Если опухоль по данным ИГХ экспрессирует сенсоры эстрогена, в морфологически неизмененной ткани наблюдается более малый уровень пролиферативной активности: понижение экспрессии маркеров пролиферации KI67, STK15 и ССNB1 при отсутствии достоверных Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология различий в уровне экспрессии мРНК самих рецепторов (Таблица 9).


Таблица 9. Анализ экспрессии генов в морфологически неизмененной ткани зависимо от уровня рецепторов стероидных гормонов в ткани рака молочной железы по данным иммуногистохимического исследования Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология.

Ген

n РЭ-

n РЭ+

Среднее РЭ-

Среднее РЭ+

p

KI 67

19

38

29,31

10,92

0,003994*

STK15

19

38

86,26

37,72

0,024436*

CCNB1

19

38

16,38

8,73

0,003210*


Подобная картина наблюдается в неизмененной ткани при прогестерон-позитивном по данным ИГХ фенотипе опухоли: понижение экспрессии KI67, STK15, ССNB1, ингибитора апоптоза BIRC Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология5, также C-erbB2 и его гомолога GRB7 (Таблица 10).


Таблица 10. Анализ экспрессии генов в морфологически неизмененной ткани зависимо от уровня рецепторов стероидных гормонов в ткани рака молочной железы по данным иммуногистохимического исследования.

Ген

n РП Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология-

n РП+

Среднее РП-

Среднее РП+

p

KI 67

21

36

25,18

12,31

0,043056*

STK15

21

36

84,22

36,21

0,022675*

CCNB1

21

36

14,57

9,36

0,044246*

BIRC5

20

35

44,86

13,36

0,016630*

C-erbB2

21

36

42,63

18,93

0,073629

GRB7

21

36

585,18

282,78

0,016074*


Анализ экспрессии генов в морфологически неизмененной ткани относительно интенсивности окрашивания клеток опухоли антителами к HER2/neu проводился в группах Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология +1 и +3. В группе +3 повышена экспрессия ингибитора пролиферации PTEN (17,9 о.е. при HER2/neu+3 по сопоставлению с 10,7 о.е. HER2/neu+1; Р=0,0257) и активатора каспаз NDRG1 (1116,07 о.е. при HER2/neu+3 по Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология сопоставлению с 441,82 о.е. HER2/neu+1; Р=0,0011). Экспрессия мРНК самого c-erbB2 (75,2 о.е. при HER2/neu+3 по сопоставлению с 16,2 о.е. HER2/neu+1; Р=0,0145) и его гомолога GRB7 (870,4 о.е. при HER2/neu Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология+3 по сопоставлению с 292,9 о.е. HER2/neu+1; Р=0,009) также была повышена в группе HER2/neu+3. А экспрессия маммаглобина была, напротив, снижена в этой группе (8949,7 о.е. при HER2/neu Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология+3 по сопоставлению с 28807,2 о.е. HER2/neu+1; Р=0,1019).

Согласно приобретенным результатам активность генов-маркеров пролиферации и ингибиторов апоптоза в морфологически неизмененной ткани ниже в случае рецептор-положительного фенотипа опухоли. А в случае HER2/neu Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология -положительного фенотипа опухоли (3+) в окружающей ткани наблюдается увеличение активности ингибиторов пролиферации.

Приобретенные отличия экспрессии генов пролиферации и апоптоза в морфологически неизмененной ткани позволяют представить, что экспрессия рецепторов стероидных гормонов и эпидермального фактора роста Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология является принципиальной фенотипической особенностью не только лишь самой опухоли, да и ткани молочной железы в целом, а наблюдаемые конфигурации экспрессии в морфологически неизмененной ткани являются проявлением системного нрава онкологического заболевания. Отсутствие Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология достоверных различий экспрессии мРНК ESR и PGR в исследуемых группах, также то, что в 79% (45 из 57 случаев) дамы в исследуемых группах находились в постменопаузе, свидетельствует о том, что данные отличия экспрессии не являются следствием Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология воздействия менструального цикла.

Таким макаром, исследование экспрессии генов в морфологически неизмененной ткани при раке молочной железы может дать дополнительную информацию в оценке пролиферативной и апоптотической активности как самой опухоли, так Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология и системного воздействия опухоли на организм.


^ 5. Анализ экспрессии генов маркеров пролиферации и апоптоза зависимо от конфигурации уровня экспрессии мРНК рецепторов прогестерона в ткани опухоли

В реальном исследовании мы нашли, что при сравнительной персональной оценке Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология экспрессии мРНК в клеточках рака молочной железы уровень экспрессии всех 17 генов может как понижаться, так и повышаться относительно значений в морфологически неизмененной ткани, что может указывать на отличия молекулярно-биологических черт опухолей. Мы Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология сравнили уровни экспрессии профиля генов в группах пациентов, у каких уровень экспрессии мРНК сенсора прогестерона в ткани опухоли был выше либо ниже по сопоставлению с его экспрессией в обычной Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология ткани.

В качестве маркера активности пролиферации и апоптоза была выбрана экспрессия мРНК сенсора прогестерона PGR.

В 30% случаев, когда по результатам иммуногистохимической оценки опухоль считается прогестерон-позитивной, экспрессия мРНК сенсора прогестерона PGR в ней Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология ниже по сопоставлению с уровнем экспрессии в образчике морфологически неизмененной ткани, приобретенной у этого же пациента, подобная ситуация наблюдается и в случае прогестерон-негативных опухолей (набросок 6).



А



Б



Набросок 6. Отличия экспрессии мРНК PGR в прогестерон Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология-позитивных (А) и прогестерон-негативных (Б) опухолях по данным ИГХ.


Мы также сравнили уровень экспрессии генов пролиферации и апоптоза зависимо от направленности конфигурации экспрессии мРНК рецепторов прогестерона в образчиках рака Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология молочной железы I-II стадии. В случае увеличения экспрессии мРНК рецепторов прогестерона в ткани РМЖ по сопоставлению с неизмененной тканью отмечено статистически важное понижение экспрессии маркеров пролиферации KI67, CCNB1, ингибиторов апоптоза BIRC Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология5 и TERT в клеточках опухоли. Экспрессия ингибитора апоптоза BCL2 повышена в PGR+ образчиках (таблица 11).


Таблица 11. Сравнительный анализ экспрессии генов в образчиках РМЖ I-II стадии зависимо от уровня экспрессии рецепторов прогестерона, оцениваемого по данным ОТ Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология-ПЦР.




n PGR+

n PGR-

Среднее PGR+

Среднее PGR-

p

KI 67

20

17

56,4

155,97

0,00037*

STK15

20

17

120,6

327,17

0,03347*

CCNB1

20

17

27,5

60,11

0,00511*

BCL2

20

17

50,1

27,64

0,02675*

BIRC5

20

17

50,1

131,13

0,00081*

TERT

16

12

11,8

48,94

0,08021


Таким макаром, относительная оценка экспрессии мРНК рецепторов прогестерона PGR с учетом конфигурации направления его экспрессии относительно Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология значений в морфологически неизмененной ткани обеспечивает выделение опухолей с неблагоприятным молекулярным фенотипом (высочайшая пролиферативная/низкая апоптотическая активность) посреди образцов рака молочной железы I-II стадии.


Выводы


  1. В образчиках рака молочной железы выявлено Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология статистически важное увеличение экспрессии активаторов пролиферации KI67, STK15, CCNB1 и ингибитора апоптоза BIRC5; понижение экспрессии ингибиторов пролиферации PTEN и NDRG1. Также увеличение экспрессии рецепторов ESR, PGR, GRB7 и матриксной металлопротеиназы ММР11.




  1. В образчиках Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология фиброаденомы по сопоставлению с морфологически неизмененной тканью снижена экспрессия активатора апоптоза ^ BAX, повышена экспрессия мРНК рецепторов ESR и C-erbB2, также матриксной металлопротеиназы ММР11.




  1. В образчиках инвазивного рака молочной железы Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология по сопоставлению с эталонами фиброаденомы статистически значимо повышена экспрессия мРНК маркеров пролиферации KI67, STK15 и CCNB1, ингибитора апоптоза BIRC5 и матриксной металлопротеиназы ММР11, снижена экспрессия ингибиторов пролиферации PTEN и NDRG1.




  1. В образчиках инвазивного рака Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология молочной железы большего размера, при наличии регионарных и гематогенных метастазов повышена экспрессия генов-маркеров пролиферации, ингибиторов апоптоза, также генов MMP11 и CTSL2. Повышение степени злокачественности РМЖ сопровождается увеличением экспрессии STК15, CCNB1 сенсора Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология эпидермального фактора роста c-erbB2, GRB7 и протеолитически активного CTSL2 и понижением экспрессии PGR и маммаглобина MGB1.




  1. Активность процессов пролиферации и апоптоза в морфологически неизмененной ткани связана с уровнем экспрессии рецепторов Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология эстрогена, прогестерона и HER2/neu в ткани опухоли при раке молочной железы.



  1. Сравнительная оценка уровня экспрессии мРНК сенсора прогестерона PGR в опухоли и морфологически неизмененной ткани может дать дополнительную информацию для выделения опухолей с Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология неблагоприятными молекулярно-биологическими чертами при раке молочной железы I-II стадии.



^ Практические советы



  1. Определение уровня экспрессии мРНК генов-маркеров пролиферации (KI67, STK15, CCNB1, PTEN), апоптоза (BIRC5, BCL2, NDRG1), клеточной дифференцировки (ESR, PGR, GRB Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология7, MGB1) межклеточных взаимодействий (MMP11, CTSL2) в ткани опухоли может быть применено в качестве дополнительного способа в диагностике рака молочной железы.



  1. Оценка конфигурации уровня экспрессии мРНК сенсора прогестерона (PGR) в Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология ткани опухоли относительно морфологически неизмененной ткани целенаправлено для выявления «неблагоприятного» молекулярного фенотипа опухоли при раке молочной железы.



Приложение. Перечень исследованных генов с коротким описанием их функции


Кластер

Ген

Функция

Пролиферация

KI67

Маркер клеточной пролиферации. Экспрессируется в фазы G1, S Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология, G2, M и не экспрессируется в G0.

^ STK15 (AURKA)

Кодирует серин-треонин киназу 6, участвующую в регуляции формирования веретена деления.

CCNB1

Кодирует белок цикли В1 семейства циклинов, контролирующих смену фаз клеточного цикла Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология. Активация комплекса циклин В-Cdk2 нужна для перехода фаз G2/M.

PTEN

Кодирует белок с фосфотазной активностью, фосфорелирующий молекулярные мишени пролиферативного каскада Akt/PKB, чем и объясняются его антипролиферативные характеристики как опухолевого Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология супрессора.

Апоптоз

BCL2

Кодируемый белок обладает антиапоптотической активностью. Образуя комплекс с белком BAG, перекрывает выделение цитохрома С из межмембранного места митохондрии.

BAX

Белок этого гена положительно регулирует высвобождение цитохрома С и на самом деле является Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология антагонистом BCL2 и BAG.

BAG

Коактиватор BCL2, владеющий антиапоптотическими качествами.

NDRG1

Кодирует белок, нужный для р53 опосредованной активации каспаз, чем и объясняются его выраженные проапоптотические характеристики.

BIRC5

Кодирует белок семейства ингибиторов апоптоза, конкретно ингибирующий Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология каспазы – мощнейший ингибитор апоптоза.

TERT

Кодирует оборотную транскриптазу теломеразы, фермент, нужный для репликации концевых (теломерных) фрагментов хромосом.

Клеточная дифференцировка

ESR

Кодирует сенсор эстрогена альфа.

PGR

Кодирует сенсор прогестерона А.

c-erbB2

Кодирует сенсор эпидермального фактора роста HER Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология2/neu.

GRB7

Кодирует белок, активирующий сенсоры семейства эпидермального фактора роста при связывании с лигандами.

MGB1

Кодирует белок маммаглобин.

Межклеточные взаимодействия

ММР11

Кодирует матриксную металлопротеиназу, участвующую в разрушении межклеточного матрикса.

CTSL Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология2

Кодирует белок катепсин с высочайшей пептидазной активностью.



^ Перечень работ, размещенных по теме диссертации:


  1. Кудинова Е.А., Бурменская О.В., Боженко В.К., Васкевич Е.Ф., Непша О.С., Мельникова Н.В., Троценко Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология И.Д., Трофимов Д.Ю., Сухих Г.Т. Экспрессия маркеров апоптоза при раке молочной железы// Технологии живых систем, 2011, Т. 8, № 7, С. 40-44.




  1. Боженко В.К., Рожкова Н.И, Кудинова Е.А., Троценко И.Д. Профиль Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология экспрессии генов как фактор прогноза при раке молочной железы. Вестник РНЦРР, 2011, Т. 11, URL http://vestnik.rncrr.ru/vestnik/v11/papers/bozh2_v11.htm




  1. Боженко В.К., Харченко Н.В., Запиров Г.М., Кудинова Е.А Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология., Троценко И.Д. Профиль экспрессии генов как фактор прогноза при пролиферативных заболеваниях органов репродуктивной системы.// Вестник РНЦРР, 2012, Т. 12, URL http://vestnik.rncrr.ru/vestnik/v12/papers/trots_v12.htm 




  1. Троценко Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология И.Д. , Рожкова Н.В., Харченко Н.В., Кудинова Е.А., Запиров Г.М., Боженко В.К.Оценка связи экспрессии рецепторов стероидных гормонов способом ОТ-ПЦР с уровнем пролиферации и апоптоза в ткани рака Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология молочной железы.//Вестник РНЦРР, 2012, Т. 12, URL http://vestnik.rncrr.ru/vestnik/v12/papers/trots1_v12.htm




  1. Солодкий В.А., Харченко Н.В.,Боженко В.К., Запиров Г.М., Васкевич Е.Н Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология., Троценко И.Д. Роль определения мРНК маммаглобина в крови при диагностике рака молочной железы.// Материалы II Междисциплинарного форума "Медицина молочной железы: на стыке специальностей", Москва, 2012, С. 56




  1. Bozhenko V.K., Rozhkova N.I., Kudinova Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология E.A., Vaskevich E. N., Bliznyukov O.P., Trotsenko I.D. Mammaglobin expression as a marker for early breast cancer.//Annals of oncology, 2012, V.23 (supl. 5), v 17.



Перечень сокращений

ИГХ - иммуногистохимическое исследование

МНТ - морфологически неизмененная Анализ экспрессии генов при пролиферативных заболеваниях молочной железы 14. 01. 12-онкология ткань

мРНК - матричная РНК

ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с оборотной транскрипцией

РМЖ – инвазивный рак молочной железы

РП - белок-рецептор прогестерона

РЭ - белок-рецептор эстрогена

ФА – фиброаденома

о.е. – относительные единицы экспрессии





analiz-finansovogo-sostoyaniya-predpriyatiya-na-primere-oao-vk-i-eh.html
analiz-finansovogo-sostoyaniya-predpriyatiya-oao-krilovskaya-rajgaz-po-dannim-buhgalterskoj-otchetnosti.html
analiz-finansovogo-sostoyaniya-predpriyatiya-po-dannim-buhgalterskoj-otchetnosti.html